Fluorescein arsenical helix binder

Fluorescein arsenical helix binder, kurz FlAsH-EDT₂, ist eine vom Fluoreszenzfarbstoff Fluorescein abgeleitete arsenhaltige chemische Verbindung, die in Peptiden und Proteinen selektiv an bestimmte Strukturen (sog. Tetracycteinsequenzen) binden kann. Nach Bindung an seine Zielstruktur und einer Anregung mit kurzwelligem Licht zeigt FlAsH eine Fluoreszenz. FlAsH-EDT₂ ist daher zur selektiven Markierung und Identifizierung von Proteinen geeignet. Ebenso findet dieser Farbstoff als ein Fluorophor für Fluoreszenzresonanzenergietransferuntersuchungen (FRET) Anwendung.

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Biochemie

Die bevorzugte Bindungsstruktur für FlAsH-EDT₂ ist eine Tetracysteinsequenz, die aus vier Cysteinbausteinen und einem aus zwei Aminosäuren bestehenden Spacer in der Form CCXXCC aufgebaut ist.^[2] Mit niedrigerer Affinität bindet FlAsH-EDT₂ auch an andere Strukturen, wie z. B. CXXC.^[3].

Synthese

FlAsH-EDT₂ kann in einer Zweischrittsynthese aus 4',5'-Bis(acetoxymercuri)fluorescein synthetisiert werden. Dazu wird 4',5'-Bis(acetoxymercuri)fluorescein mit einem molaren Überschuss an Arsen(III)-chlorid und Diisopropylethylamin in N-Methylpryrrolidon unter Palladiumacetat-Katalyse umgesetzt. Das Reaktionsprodukt wird anschließend mit einem Überschuss an 1,2-Ethandithiol zu FlAsH-EDT₂ umgesetzt^[2].

Quellen

1. ↑ http://probes.invitrogen.com/media/msds/345611.html
2. ↑ ^{a b} B. Albert Griffin, Stephen R. Adams, Roger Y. Tsien (1998): Specific covalent labeling of recombinant protein molecules inside live cells. In: Science. Bd. 281, S. 269-272. PMID 9657724 doi:10.1126/science.281.5374.269
3. ↑ Katarina Stroffekova, Catherine Proenza, Kurt G. Beam (2001): The protein-labeling reagent FLASH-EDT₂ binds not only to CCXXCC motifs but also non-specifically to endogenous cysteine-rich proteins. In: Pflügers Arch. Bd. 442, S. 859-866. PMID 11680618 doi:10.1007/s004240100619