NADI-Reagenz

Das NADI-Reagenz ist eine Lösung aus 1-Naphthol und N,N-Dimethyl-1,4-phenylendiamin. Es wird zum Nachweis des Enzyms Cytochrom c Oxidase (Oxidase-Test) in Bakterien und in der Histologie genutzt. Phenylendiamin reduziert über Cytochrom c die Cytochrom c Oxidase in der Zelle und wird dadurch oxidiert zum Chindiimin. Chindiimin kuppelt mit Naphthol zu einem farblosen Leukofarbstoff, der zum Farbstoff Naphthol Blau (Indophenol Blau) oxidiert wird.

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Paul Ehrlich beschrieb 1885 die NADI-Reaktion unter Bildung von Indophenol im Organismus als Reaktion einer "Indophenol Oxidase".

Reagenz

Das NADI-Reagenz besteht aus eine Lösung zu gleichen Teilen aus 50 mM 1-Naphthol in 50 %igen Ethanol und 50 mM N,N-Dimethyl-1,4-phenylendiamin in Phosphat-Puffer (pH 7).

Zeigt sich innerhalb einer Minute nach Zugabe des Reagenz eine Blaufärbung der Bakterienzellen, so ist das Bakterium Oxidase-positiv. Bei keiner oder späteren Reaktion ist das Bakterium Oxidase-negativ.

Reaktionsmechanismus

Das p-Phenylendiamin-Derivat wird über das farbige, stabile Semichindiimin-Radikalkation (Würster Rot) oxidiert zum Chindiimin-Derivat.

Das Chindiimin-Derivat reagiert mit dem Kuppler (Naphthol) zu einer farblosen Leukoverbindung. Durch Oxidation der Leukoverbindung entsteht ein wasserunlöslicher Indophenol-Farbstoff (Naphthol Blau).

Literatur

• Ehrlich, P. (1885): Das Sauerstoffbedürfnis des Organismus. Eine farbenanalytische Studie. Habilitationsschrift, Universität Berlin.
• Gaby, W.L. und Hadley, C. (1957): Practical laboratory test for the identification of Pseudomonas aeruginosa. In: J. Bacteriol. Bd. 74, S. 356-358. PMID 13475249 PDF
• Nickel, U. (1978): Reaktionen mit Wursterschen Kationen. In: Chemie in unserer Zeit. Bd. 12, Nr. 3, S. 89-98. doi:10.1002/ciuz.19780120305