NADI-Reagenz

Das NADI-Reagenz ist eine Lösung aus 1-Naphthol und N,N-Dimethyl-1,4-phenylendiamin. Es wird zum Nachweis des Enzyms Cytochrom c Oxidase (Oxidase-Test) in Bakterien und in der Histologie genutzt. Phenylendiamin reduziert über Cytochrom c die Cytochrom c Oxidase in der Zelle und wird dadurch oxidiert zum Chindiimin. Chindiimin kuppelt mit Naphthol zu einem farblosen Leukofarbstoff, der zum Farbstoff Naphthol Blau (Indophenol Blau) oxidiert wird.

Weiteres empfehlenswertes Fachwissen

Höhere Wägeleistung in 6 einfachen Schritten

Wie kann man Pipetten schnell überprüfen?

Leitfaden zu den grundlegenden Laborkenntnissen

Paul Ehrlich beschrieb 1885 die NADI-Reaktion unter Bildung von Indophenol im Organismus als Reaktion einer "Indophenol Oxidase".

Reagenz

Das NADI-Reagenz besteht aus eine Lösung zu gleichen Teilen aus 50 mM 1-Naphthol in 50 %igen Ethanol und 50 mM N,N-Dimethyl-1,4-phenylendiamin in Phosphat-Puffer (pH 7).

Zeigt sich innerhalb einer Minute nach Zugabe des Reagenz eine Blaufärbung der Bakterienzellen, so ist das Bakterium Oxidase-positiv. Bei keiner oder späteren Reaktion ist das Bakterium Oxidase-negativ.

Reaktionsmechanismus

Das p-Phenylendiamin-Derivat wird über das farbige, stabile Semichindiimin-Radikalkation (Würster Rot) oxidiert zum Chindiimin-Derivat.

Das Chindiimin-Derivat reagiert mit dem Kuppler (Naphthol) zu einer farblosen Leukoverbindung. Durch Oxidation der Leukoverbindung entsteht ein wasserunlöslicher Indophenol-Farbstoff (Naphthol Blau).

Literatur

• Ehrlich, P. (1885): Das Sauerstoffbedürfnis des Organismus. Eine farbenanalytische Studie. Habilitationsschrift, Universität Berlin.
• Gaby, W.L. und Hadley, C. (1957): Practical laboratory test for the identification of Pseudomonas aeruginosa. In: J. Bacteriol. Bd. 74, S. 356-358. PMID 13475249 PDF
• Nickel, U. (1978): Reaktionen mit Wursterschen Kationen. In: Chemie in unserer Zeit. Bd. 12, Nr. 3, S. 89-98. doi:10.1002/ciuz.19780120305